❶ 在家中怎樣做葉綠素提取實驗
葉綠素是脂溶來性色素,一般只要是源有機溶劑都可以提取。但根據葉綠素的極性,最好的還是丙酮,其次是氯仿,正己烷,甲醇和乙醇。丙酮是常用的溶劑中對葉綠素溶解度最大的溶劑,最小的則是乙醇。丙酮在常溫下通過振盪就可以完全提取葉綠素,而乙醇的話你就必須要加熱,或者是加入四分之一體積的醋酸才能達到這個效果。濾紙條倒是寬窄無所謂,根據你自己需要了。
❷ 葉綠素的提取和分離
一 實驗目的
1.掌握提取葉綠素的方法;
2.了解薄層層析的原理,掌握薄層層析的一般操作和定性鑒定方法
二 實驗原理
1.葉綠素提取
高等植物體內的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類,主要包括葉綠素a (C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H70O6N4Mg)、β—胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)等4種。葉綠素a和葉綠素b為吡咯衍生物與金屬鎂的配合物,胡蘿卜素是一種橙色天然色素,屬於四萜類,為一長鏈共軛多烯,有α、β、γ三種異構體,其中,β異構體含量最多。葉黃素為一種黃色色素,與葉綠素同存在於植物體中,是胡蘿卜素的羥基衍生物,較易溶於乙醇,在乙醚中溶解度較小。根據它們的化學特性,可將它們從植物葉片中提取出來,並通過萃取、沉澱和色譜方法將它們分離開來。
2.薄層色譜
薄層層析是快速分離和定性分析微量物質的一種極為重要的實驗技術,具有設備簡單、操作方便而快速的特點。它是將固定相支持物均勻地鋪在玻片上製成薄層板,將樣品溶液點加在起點處,置於層析容器中用合適的溶劑展開而達到分離的目的。用此法分離時幾乎不受溫度的影響,可採用腐蝕性顯色劑,而且可在高溫下顯色,特別適用於揮發性小或在較高溫度下易發生反應的物質,同時也常用來跟蹤有機反應或監測有機反應完成的程度。
薄層層析的器材選擇:
(1)基板:玻璃、塑料、金屬箔,常用玻璃板。
(2)吸附劑:
吸附劑要有合適的吸附力,並且必須與展開劑和被吸附物質均不起化學反應。可用作吸附劑的物質很多,常用的有硅膠和氧化鋁,由於吸附性好,適用於各類化合物的分離,應用最廣。選擇吸附劑時主要根據樣品的溶解度、酸鹼性及極性。氧化鋁一般是微鹼性吸附劑,適用於鹼性物質及中性物質的分離;而硅膠是微酸性吸附劑,適用於酸性物質及中性物質的分離。以下簡單介紹吸附劑的幾個基本參數。
種類:常用:氧化鋁(強極性)、硅膠(中強極性)
不常用:硅藻土、纖維素、糖類、活性碳
符號:H——無任何添加劑;G——加有鍛石膏(Gypsum,CaSO4·1/2 H2O)粘合劑;
F——加有熒光素(Fluorescein)
CMC——加有羧甲基纖維素鈉(Carboxymethyl cellulose)
例:硅膠GF254表示硅膠中既加有煅石膏粘合劑,也加有熒光素,可以在波長254nm的紫外光下激發出熒光
粒度:目:1cm2內的篩孔數,數目越大,顆粒越小。薄層所用吸附劑顆粒較細,氧化鋁為200目,硅膠為100~150目。
μ:顆粒的平均直徑,以微米表示。例如:40μ的顆粒與100目相當。
活性:
吸附劑按其含水量的多少各分為五個等級:I級含水量最少,活性最高;V級含水量最多,活性最低;但並不是活性越高分離效果越好,選用哪種活性級別的吸附劑,要用實驗的方法來確定。
酸鹼性:
市售氧化鋁有酸性(用以分離酸性化合物)、中性、鹼性(用以分離生物鹼等鹼性化合物),其蒸餾水洗出液的pH值分別為4、7.5、9—10;其中以中性氧化鋁應用最廣,可用來分離各種化合物,特別是那些對酸、鹼敏感的化合物。
硅膠沒有酸鹼性之分。
(3)展開劑
在樣品組分-吸附劑-展開劑三個因素中。對一確定組分,樣品的結構和性質可看作是一不變因素,吸附劑和展開劑是可變因素。而吸附劑的種類有限,因此選擇合適的展開劑就成為解決問題的關鍵。展開劑的選擇有以下要求:
(a)對待測組分有很好的溶解度。
(b)能使待測組分與雜質分開,與基線分離。
(c)使展開後的組分斑點圓而集中,不應有拖尾現象。
(d)使待測組分的Rf值最好在0.4~0.5,如樣品中待測組分較多,Rf值則可在0.25~0.75范圈內,組分間的Rf值最好相差0.1左右。由於薄層色譜法用途非常廣泛,國內外均有現成的鋪有吸附劑的薄層板出售。一般實驗室中也可自己制備。
(e)不與組分發生化學反應,或在某些吸附劑存在下發生聚合。
(f)具有適中的沸點和較低的粘滯度。
展開劑的極性是指與樣品組分相互作用時。展開劑分子與吸附劑分子的色散作用、偶極作用、氫鍵作用及介電作用的總和。展開劑要根據樣品的極性及溶解度,吸附劑活性等因素進行選擇,總的原則是展開劑的極性能使組分的Rf值在0.5左右。常用溶劑極性次序是:石油醚<環己烷<苯<乙醚<氯仿<乙酸丁酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇。
如一種溶劑不能充分展開,可選用二元或多元溶劑系統。
4.展開槽與展開:
薄層的展開在密閉的容器即展開槽或稱為層析缸中進行。
展開:
合適的展開劑用量為浸及下端硅膠,但不浸及樣點;點樣端向下,每次只展開一塊,放在正中,以免爬斜(進而展開傾斜)。
5.顯色:
如果化合物本身有顏色,就可直接觀察它的斑點。如果本身無色,可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點(有苯環的物質都有),用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置;對於在紫外燈光下不顯色的,可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點(因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點),顯色後,立即用鉛筆標出斑點的位置。常用
普適性顯色劑:濃硫酸、碘蒸氣、熒光素,專用顯色劑:茚三酮、三氯化鐵溶液等。
三、實驗儀器與葯品
儀器:半微量玻璃儀器一箱,小燒杯,層析缸(槽),載玻片(100mm×25mm)乾燥器,電吹風,毛細管,移液管,研缽,布氏漏斗,抽濾裝置。
試劑:硅膠,1% CMC,石油醚(60~90℃),乙醇,丙酮,乙醚,飽和NaCl溶液,無水Na2SO4
四、實驗步驟
1.制板:
將硅膠加 1% CMC,調成槳狀(硅膠:CMC=1:3~4)(在平鋪玻璃板上能晃動但不能流動),將其塗在載玻片上(100mm×25mm)),為使其坦平,可將載玻片用手端平晃動,至平坦為止,放在干凈平坦的檯面上,晾乾之後放入105℃烘箱活化1小時,取出放入乾燥器內待用。
2、葉綠素的提取
在研缽中放入幾片(約5g)菠菜葉(新鮮的或冷凍的都可以.如果是冷凍的,解凍後包在紙中輕壓吸左水分)。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液,適當研磨。將提取液用滴管轉移至分液漏斗中,加人10 mL飽和NaCl溶液(防止生成乳濁液)除去水溶性物質,分去H2O層,再用蒸餾水洗滌兩次。將有機層轉入乾燥的小錐形瓶中,加2g入無水Na2SO4乾燥。乾燥後的液體傾至另—錐形瓶中(如溶液顏色太淺,可在通風櫃中適當蒸發濃縮)。
3、點樣
用一根內徑 1mm的毛細管,吸取適量提取液,輕輕地點在距薄板一端1.5cm處,平行點兩點,兩點相距1cm左右。若一次點樣不夠,可待樣品溶劑揮發後.再在原處點第二次,但點樣斑點直徑不得越過2mm。
4、展開
先在層析缸中放入展開劑[石油醚(60~90℃)-丙酮—乙醚(體積比為3:1:1)],加蓋使缸內蒸氣飽10min, 再將薄層板斜靠於層析缸內壁。點樣端接觸展開劑但樣點不能浸沒於展開劑中,密閉層祈缸。待展開劑上升到距薄層板另一端約1crm時,取出平放,用鉛筆或小針劃前沿線位置,晾乾或用電吹風吹乾薄層。
五、實驗注意事項
1.制板時用注意使板上硅膠厚度盡量一致。
2.植物葉片不要研成糊狀,否則會給分離造成困難
❸ 求綠葉中色素的提取和分離實驗的過程
研缽就是用來研磨葉片的啊~~~還要加碳酸鈣和二氧化硅研磨充分!你可以去網路上看看它長啥樣的。
2、研磨液迅速倒入以及用棉塞是因為研磨要加入丙酮,丙酮很容易揮發,丙酮是用來溶解提取葉綠體中的色素,因為葉綠素能溶解在丙酮里。單層尼龍布是為了過濾充分吧,因為葉片的研磨有殘渣。
3、「將乾燥的定性濾紙條剪成長與寬略小於試管長與寬的濾紙條」是因為,你還要放到試管中,讓它跑開,在後面的步驟里。濾紙條一端剪去兩個角使之呈梯形,是為了防止濾液就沿兩邊往上跑,這樣就分不開了。就象毛細管一樣的那個原理。距離1cm是因為等下要放在分離液中跑,又不能讓葉綠素浸到分離液中啊。用鉛筆可以劃得整齊,這樣讓每一種色素都有共同的起點,才分得開!
4、畫得越細越多次,就越濃,越好跑,分得開,越清楚。
還有不懂的就看下原理:
分離要用的主要試劑是層析液。層析液是一種脂溶性很強的有機溶劑。葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同:溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快;溶解度低的隨層析液在濾紙上擴散得慢。
層析分離葉綠體中的色素:將紙條畫有濾液細線的一端置於燒杯中的層析液中,注意千萬不要將濾液細線浸沒在層析液中,否則會使色素溶解而導致試驗失敗。層析液是揮發性較強的有機溶劑,並且具有一定的毒性,所以在操作中要盡量用培養皿蓋住燒杯口。
觀察實驗結果:最後濾紙條上將分離出四條色素帶,顏色從上往下分別是橙黃色、黃色、藍綠色和黃綠色,四種色素分別是胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a和葉綠素b。
❹ 葉綠素的提取和分離實驗的具體步驟及實驗說明
好像高中生物書上有具體步驟
❺ 提取葉綠體中的色素實驗
B
加入少許碳酸鈣的目的是為了防止在研磨過程中,葉綠素受到破壞。具體的情況是這樣的專:葉綠體中屬的色素所處的環境具微鹼性,實驗中,由於研磨會使細胞結構遭到破壞,細胞液(具微酸性)流出,酸性的細胞液就會直接接觸葉綠體中色素,致使葉綠素的分子結構遭到破壞,使葉綠素失鎂,呈黃褐色,所以加入少許碳酸鈣是為了中和細胞液的酸性,可起到保護葉綠素的作用.
❻ 葉綠素提取實驗目的是什麼
掌握提取和分離葉綠體中色素的方法;了解葉綠體中色素的種類
❼ 葉綠素提取實驗
因為葉綠體中包含有葉綠素a、葉綠素b、葉黃素和類胡蘿卜素這四種色素,其中葉綠素a和葉綠素b占的比重較大,它們的顏色都是綠色的,所以提取液就呈現綠色
❽ 關於葉綠素的提取和分離實驗
熒光:葉綠素溶液在透射光下呈綠色,而在反射光下呈紅色的現象。葉綠素分子吸收量子從基態上升到激發態,後因不穩定從第一單線態回到基態所發射的光就稱為熒光。
葉綠素的酒精溶液在透射光下為翠綠色,而在反射光下為棕紅色。這個紅光就是葉綠素受光激發後發射的熒光。這個現象就是熒光現象。其主要原理是由於葉綠素有兩個不同的吸收峰。葉綠素吸收光的能力極強,如果把葉綠素的丙酮提取液放在光源與分光鏡之間,可以看到光譜中有些波長的光被吸收了。因此,在光譜上就出現了黑線或暗帶,這種光譜叫吸收光譜。葉綠素吸收光譜的最強區域有兩個:一個是在波長為640nm~660nm的紅光部分,另一個在波長為430nm~450nm的藍紫光部分。對其他光吸收較少,其中對綠光吸收最少,由於葉綠素吸收綠光最少,所以葉綠素的溶液呈綠色。葉綠素的丙酮提取液在透射光下是翠綠色的,而在反射光下是綜紅色的
熒光效應在植物生理學中有廣泛的應用。用這個效應可以研究植物的抗逆生理。因為在逆境下,植物的葉綠素會發生變換,研究其熒光,可以作為植物受逆境脅迫程度的指標。
另外,還有一個磷光效應。就是當熒光出現後,立即中斷光源,用靈敏的光學儀器還可在短時間內看到紅色「余暉」,這就是磷光。
❾ 葉綠素提取實驗,四種色素顏色是什麼
你好,從上到下依次是:
胡蘿卜素,葉黃素,葉綠素a,葉綠素b。顏色:
橙黃色,黃色,藍綠色,黃綠色
謝謝
❿ 葉綠素的提取以及實驗材料
葉綠體色素的提取
實驗原理
植物葉綠體色素是吸收太陽光能,進行光合作用的重要物質回。它一般由葉綠素答a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。這些色素都不溶於水,而溶於有機溶劑,故可用乙醇、丙酮等有機溶劑提取。
實驗材料
鹵地菊葉片
器材:研缽、剪刀
實驗步驟
(1)取植物新鮮葉片1克,洗凈,擦乾,去掉中脈剪碎,放人研缽中。
(2)研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉,2-3 mL95%乙醇,研磨至糊狀,再加2-3 mL95%乙醇,過濾,即得色素提取液。